蛋白的酵母雙雜交實驗是以酵母的遺傳分析為基礎，研究蛋白間相互作用的一種有效技術手段。轉錄活化蛋白可以和DNA上特異的序列結合而啟動相應基因的轉錄反應。這種DNA結合與轉錄激活的功能是由其上兩個相互獨立的結構域，即DNA結合結構域(Binding Domain, BD)和轉錄活化結構域(Activation Domain,AD)共同完成的。

　　以Gal4系統為例，BD和AD分別由Gal4蛋白上不同的兩個結構域(1-147aa與768-881aa)構成。在利用GAL4系統篩選cDNA文庫或研究蛋白間的相互作用時，DNA結合結構域與靶蛋白即"誘餌"相結合，轉錄活化結構域與文庫蛋白或要驗證的蛋白相結合。一般情況下，單獨的BD可以與GAL4上游活化序列（GALUAS）結合但不能引起轉錄，單獨的AD則不能與GAL UAS結合；只有當BD與AD分別表達的融合蛋白由于相互作用而導致兩者在空間上相互靠近時，BD與AD才能與GAL UAS結合并且引起報道基因的轉錄，從而激活下游報告基因，通過這一系列實驗來驗證兩個蛋白之間的相互作用。

艾柏森生物提供如下服務內容：

★ 酵母雙雜交文庫的構建：

1. 總RNA提取及mRNA純化；

2. SMART技術合成cDNA一鏈，LD-PCR合成雙鏈cDNA；          

3. 雙鏈cDNA的純化；      

4. 轉化AH109酵母感受態細胞；          

5. 收集轉化子及檢測文庫質量。

★ 酵母雙雜交誘餌載體的構建：

克隆cDNA全長序列，構建包含目的基因的PGBKT7誘餌載體，轉化Y187酵母菌株。

★ 酵母雙雜交篩選及鑒定

★ 您需要提供以下材料：

1. 新鮮組織材料、凍存材料或高質量RNA、誘餌基因的模板。

2. 盡可能全面的實驗相關信息。

★ 您將獲得以下結果：

構建好的雙雜交文庫甘油菌：
1. 文庫容量≥106；
2. 文庫滴度≥107cfu/ml；
3. 插入片段平均大于1kb（不同物種略有差別）；
4. 減低高豐度表達基因10-100倍。

酵母雙雜交篩選得到的陽性克隆

實驗過程報告及相關數據圖片

★ 服務周期：

文庫構建1個月

文庫篩選1-2個月