畢赤酵母表達系統介紹

畢赤酵母（Pichia pastoris）表達系統是近年來發展迅速、應用廣泛的一種真核表達系統。它是甲醇營養型酵母菌，有兩個乙醇氧化酶（Alcohol oxidase, AOX）編碼基因AOX1和AOX2，兩種序列相似，AOX1基因嚴格受甲醇誘導和調控。當甲醇為唯一碳源時，AOX1啟動子可被甲醇誘導，啟動乙醇氧化酶的表達，從而用甲醇進行代謝，含AOX1啟動子的質粒可用來促進編碼外源蛋白的目的基因的表達。

表達菌株特點

GS115：AOX1和AOX2基因都正常表達AOX蛋白（乙醇氧化酶），甲醇的利用率高，接近于野生型，屬于甲醇快速利用型（Mut+）

KM71：AOX1基因被大部分剔除，只能利用AOX2為AOX編碼，甲醇的利用速率變慢，表現為甲醇慢利用型（Muts）

外源基因的整合方式不同會導致表達菌株的表型不同：

菌株表型

常用表達載體及篩選標記

載體信息

信號肽

對于胞外表達的蛋白除了可以用載體自帶的信號肽，還有以下信號肽可供選擇：

信號肽序列

畢赤酵母表達系統的優勢

1. 含有特有的強有力的AOX（醇氧化酶基因）啟動子，用甲醇可嚴格地調控外源基因的表達。

2. 培養成本低，產物易分離，畢赤酵母所用發酵培養基成本合理，一般碳源為甘油或葡萄糖及甲醇，其余為無機鹽，培養基中不含蛋白，有利于下游產品分離純化。

3. 外源蛋白基因遺傳穩定，外源基因能以高拷貝數整合到畢赤酵母基因組中，不易丟失并能得到高表達菌株。

4. 作為真核表達系統，畢赤酵母具有真核生物的亞細胞結構，具有糖基化、脂肪酰化、蛋白磷酸化等翻譯后修飾加工功能。

艾柏森生物酵母表達系統的優勢

1. 具備完備的畢赤酵母表達平臺，可以根據蛋白特性或客戶的需求設計不同的實驗方案；

2. 具有高通量的篩選平臺，可以快速有效的得到最佳表達條件；

3. 具有大規模發酵生產能力

服務組合

經典案例

表達載體pPIC3.5K（胞內表達），目的蛋白32.49KD（理論值）

表達菌株：GS115/KM71

誘導條件：甲醇濃度0.5%/1%，誘導時間24h/48/72h

結果分析：從SDS-PAGE膠圖中可以看到，目的蛋白（糖基化后40KDa左右）有明顯表達，其中GS115-5#-24h，0.5%甲醇，GS115-2#-48h，1%甲醇，GS115-3#-48h，01%甲醇，KM71-1#-72h，1%甲醇，都有很明顯的目的條帶，目的蛋白成功表達。