哺乳動物細胞表達系統的優勢

1. 能實現翻譯后修飾及正確的蛋白折疊復性；

2. 表達水平高；

3. 高效啟動子控制蛋白表達

4. 適合大規模蛋白表達。

艾伯森生物哺乳表達系統

艾伯森生物提供表達載體構建、瞬時轉染、表達測試及大規模動物細胞發酵和蛋白純化等一站式蛋白技術服務。

表達載體：pcDNA 3.1，pIRES，pTT3，pCEP4，pATX1等常規載體以及我司分子技術人員自行合成與后期改造的專利性載體。

艾伯森生物哺乳表達系統服務內容

1. 載體構建及改進

 1) 可將cDNA克隆至客戶或艾伯森生物提供的哺乳細胞的表達載體中；

 2) 可在表達載體中添加分泌信號肽和純化標簽，促進蛋白分泌表達及滿足一步親和純化的需求；

 3) 能生產并鑒定高效穩定細胞系，適合大規模發酵生產。

2. 穩定基因表達符合長期生存需求。整個實驗操作流程提供長期穩定及規模可調的蛋白生產

3. 瞬時表達（TGE）

 1) 與穩定基因表達相比，TGE主要適用于短期內制備重組蛋白，一般在10天內即可快速轉染，無需質粒DNA的遺傳性選擇

 2) 艾柏森生物的瞬時表達使用懸浮細胞，能夠完成體積到100L的蛋白表達。

4. 工藝過程開發及擴大規模。艾柏森生物能夠優化表達過程以及表達產物，檢測細胞表達量，摸索發酵罐發酵條件，適合大規模發酵生產。

5. 純化。艾伯森生物擁有完整的蛋白純化系統，親和純化，凝膠過濾，離子交換及疏水層析等純化方法，能夠完成帶標簽與不帶標簽蛋白的純化，以及純化工藝的摸索。

服務流程

經典案例

某生物細胞器基質蛋白，全長334aa，大小37.03kDa，自帶Fc標簽蛋白，采用293F細胞表達。我們在對其編碼基因進行全密碼子優化后，把它構建到pTT3載體上，測序驗證無誤后，進行了30ml體積試表達，如Figure1：

Figure 1. Expression result .Coomassieblue staining.

MW. Molecular weight marker.?. Non-transfected (negative control).

目的蛋白的最大回收率，我們先后對Flowthrough進行了兩次Protein G純化（Figure2~Figure3），可以看到在第二次純化后，FT中尚殘留的目的蛋白。

Figure2. Target protein purification profile.

Figure 3. Target proteinpurification profile.Reducing-PAGE analysis.

為此我們提高了鹽濃度至300mMNaCl，這次洗脫后，FT中剩余的蛋白量顯著降低，如Figure4.

Figure 5. Target protein purificationprofile. Coomassie blue staining.Reducing-PAGEanalysis.

再是表達摸索清楚成熟的實驗條件后，我們進入大體積制備，2L發酵。

Figure 6. Target protein purification profile and QC gel.