艾柏森生物提供重組人源化抗體穩定過表達細胞株構建服務。流程如下——

1. 載體構建&病毒包裝

將人源化的抗體基因轉接到慢病毒載體上，然后對質粒表達進行檢測，通過包裝獲得過表達目的基因的慢病毒質粒。慢病毒載體系統的包裝成分與載體成分一起轉染293細胞進行包裝；24至48小時后，收集富含慢病毒顆粒的細胞上清液，濃縮后進行滴度測試。

2. 細胞轉染

常用的真核表達載體的抗性標志物有嘌呤霉素(Puromycin)、潮霉素(Hygromycin)和新霉素(Neomycin)。首先確定Puromycin/G418的篩選濃度和病毒轉染濃度，然后病毒懸液轉染細胞24h,Puromycin/G418篩選穩轉株，ELISA和WB法鑒定。

3. 單克隆化

使用Molecular ClonePix2系統,高通量、自動化的篩選出100-200個高水平分泌克隆，并從中挑選最佳10個高產克隆，進行下一步的穩定性測試。

4. 細胞系穩定篩選

細胞株多次傳代數次后，就有可能會出現遺傳不穩定性。我們挑選出最優的10個克隆，進行10次傳代后，qPCR和WB法檢測細胞株的穩定性。最后我們提供序列及載體報告, 3株表達最好的細胞株，表達分析、穩定性測試報告以及詳細的穩定細胞株構建報告。